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如何確保ELISA實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性?

更新時(shí)間:2025-12-24    點(diǎn)擊次數(shù):57

  如何確保ELISA實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性?

  一、標(biāo)準(zhǔn)品處理與加樣規(guī)范

  標(biāo)準(zhǔn)品處理?:凍干標(biāo)準(zhǔn)品需用配套稀釋液復(fù)溶,渦旋混勻后梯度稀釋(如640pg/ml至0pg/ml),避免反復(fù)凍融?。

  加樣規(guī)范?:

  使用校準(zhǔn)移液器,加樣時(shí)吸頭貼壁45°緩慢注入,避免氣泡和液體掛壁。

  控制加樣速度(5分鐘內(nèi)完成),復(fù)孔間誤差<5%?。

  二、孵育控制與洗滌優(yōu)化

  孵育控制?:37℃恒溫孵育,封板膜密封防止蒸發(fā),震蕩儀輔助混勻?。

  洗滌優(yōu)化?:

  洗滌液現(xiàn)配現(xiàn)用(1:20稀釋),每孔注滿后靜置30秒,重復(fù)5次。

  拍干時(shí)避免殘留,邊緣孔需重點(diǎn)檢查?。

  三、封閉加強(qiáng)與試劑平衡

  封閉加強(qiáng)?:1% BSA或明膠封閉1.5小時(shí),減少非特異性結(jié)合?。

  試劑平衡?:

  試劑盒室溫平衡15-30分鐘,底物避光保存。

  酶標(biāo)板開封后密封袋保存,防止受潮?。

  四、樣本處理與移液校準(zhǔn)

  樣本處理?:

  血清樣本離心后分裝,避免反復(fù)凍融;高濃度樣本需預(yù)稀釋。

  溶血或脂血樣本需超濾處理?。

  移液校準(zhǔn)?:每月校準(zhǔn)移液器,加樣前檢查密封性?。

  五、溫育記錄與批次管理

  溫育記錄?:使用定時(shí)器控制孵育時(shí)間,避免人為誤差?。

  批次管理?:

  不同批次試劑禁止混用,標(biāo)記開瓶日期。

  質(zhì)控樣本(如陽性對(duì)照)每板必設(shè)?。

  通過以上措施可顯著提升ELISA實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性,確保結(jié)果穩(wěn)定可靠。

  注:本產(chǎn)品僅供科研使用,不作為實(shí)驗(yàn)依據(jù)。具體操作請(qǐng)以實(shí)際試劑盒說明書為準(zhǔn)。

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